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最開始的CAR-T只有CD3z作信號段，CAR-M借用的也是CD3z，最近有篇文章，給CAR-M加料了信號段，整理分享之，具體內(nèi)容如下：

一代CAR-T只有一個(gè)CD3z信號段，效果差些，所以有了添加CD28或4-1BB的二代CAR-T（上圖來源于網(wǎng)絡(luò)）

從二代CAR-T發(fā)散到CAR-M上，一代CAR-M只有CD3z信號段，TLR4可促進(jìn)巨噬細(xì)胞促炎作用，作者計(jì)劃借用TLR4胞內(nèi)信號段，構(gòu)建二代CAR-M，使新的CAR-M趨向M1亞型（上圖來源于網(wǎng)絡(luò)）

CAR設(shè)計(jì)：沒有信號段、只有一個(gè)CD3z或TIR、同時(shí)有CD3z和TIR

先給多能干細(xì)胞iPSC裝上CAR，然后誘導(dǎo)分化成CAR-巨噬細(xì)胞

CAR表達(dá)情況

iPSC在不同分化階段，TLR4相關(guān)基因表達(dá)量不同，早期表達(dá)高，所以后面選分化早期的CAR-M進(jìn)行實(shí)驗(yàn)

構(gòu)建表達(dá)EGFRvIII的靶細(xì)胞

CAR-M可識別結(jié)合靶細(xì)胞，而后將其吞噬

CAR-M可殺靶細(xì)胞：可以看到，12h差異不大，但到24h，TIR信號段CAR-M效果優(yōu)于CD3z信號段CAR-M

TIR信號段CAR-M響應(yīng)靶細(xì)胞分泌更多細(xì)胞因子

同時(shí)有兩個(gè)CD3z、TIR信號段利于某些細(xì)胞因子表達(dá)

同時(shí)有兩個(gè)CD3z、TIR信號段利于細(xì)胞因子分泌

同時(shí)有兩個(gè)CD3z、TIR信號段的CAR-M選擇性殺靶細(xì)胞能力最強(qiáng)（U87MG、HepG2是EGFRvIII陰性的對照細(xì)胞）

CAR-M、靶細(xì)胞共培養(yǎng)體系中再加入T細(xì)胞，看T細(xì)胞激活，CD3z、TIR雙信號段的CAR-M介導(dǎo)T細(xì)胞激活的能力最強(qiáng)（HLA-NY是陽性對照）

CD3z、TIR雙信號段的CAR-M高表達(dá)M1 marker，低表達(dá)M2 marker，更趨向M1亞型

開始體內(nèi)，CD3z、TIR雙信號段的CAR-M效果更好

體內(nèi)，也是CD3z、TIR雙信號段的CAR-M更趨向M1亞型

另一體內(nèi)模型，再做，依然是CD3z、TIR雙信號段的CAR-M效果更好

又做了靶向GPC3的CAR-M    

CD3z、TIR雙信號段的CAR-M體外高效殺靶細(xì)胞HepG2（U87MG是GPC3陰性的對照細(xì)胞）

體內(nèi)，CD3z、TIR雙信號段的CAR-M效果好

和CD47單抗聯(lián)用

前面是人的CAR-M，又做了小鼠的CAR-M

小鼠CAR-M體外吞靶細(xì)胞

 小鼠CAR-M體內(nèi)抑制腫瘤生長

CAR-M在腫瘤微環(huán)境中趨向M1亞型，調(diào)動NK、T細(xì)胞

          TIR信號段的引入驅(qū)動了下游基因RELA的表達(dá)（左側(cè)示意圖來源于網(wǎng)絡(luò)）

TLR4被激活后，另一個(gè)重要的分子事件是NFkB核轉(zhuǎn)位（上圖來源于網(wǎng)絡(luò)）

有TIR信號段的CAR-M響應(yīng)靶細(xì)胞，NFkB發(fā)生核轉(zhuǎn)位，暗示CAR-M的TIR信號被成功調(diào)動

          JSH23抑制NFkB后，CAR-M殺靶細(xì)胞被顯著抑制，暗示依賴NFkB信號

利用單細(xì)胞測序技術(shù)繼續(xù)挖掘引入TIR信號段給CAR-M帶來的利好

單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)也發(fā)現(xiàn)，雙信號段段CAR-M M1 marker CD80、CD86表達(dá)更高，M2 marker CD206表達(dá)低

雙信號段CAR-M M1相關(guān)基因水平高

雙信號段CAR-M M2相關(guān)基因水平低

  最后，腫瘤細(xì)胞是怎么死的呢？發(fā)現(xiàn)和CAR-M共培養(yǎng)后，凋亡相關(guān)基因水平升高，暗示發(fā)生了凋亡

          驗(yàn)證測序結(jié)果，CAR-M誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，雙信號段效果最好

抗體阻斷TNF后，CAR-M誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用受限，暗示依賴TNF誘導(dǎo)凋亡

巨噬細(xì)胞可以通過胞葬作用給凋亡細(xì)胞收尸，可以看到CAR-M“吞了”腫瘤細(xì)胞

      吞的過程，綜合起來，CAR-M通過TNF誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，而后通過胞葬作用“收尸”

總圖

對于實(shí)體瘤，巨噬細(xì)胞先天具有浸潤到腫瘤部位的優(yōu)勢，因此CAR-M實(shí)體瘤療法不容忽視，我們之前整理分享過不少相關(guān)文章【CNS文獻(xiàn)分享】嵌合抗原受體巨噬細(xì)胞（CAR-M）、用納米顆粒在體內(nèi)制備CAR-M、LNP遞送mRNA體內(nèi)制備CAR-M、敲掉ACOD1助力CAR-M。

參考文獻(xiàn)：

Anhua Lei, Hua Yu, Shan Lu, Hengxing Lu, Xizhong Ding, et al. A second-generation M1-polarized CAR macrophage with antitumor efficacy [J]Nature Immunology, 27 November 2023.